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AAV Neutralizing Antibody Assay

AAV中和抗体检测

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近年来,腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)已成为基因治疗药物常用的递送载体工具。然而,在临床治疗上,AAV特异性抗体在一定程度上会降低基因治疗的效果,这极大限制了AAV基因治疗的推广。另一方面,AAV抗体的效价在个体内会随着时间的推移而变化,治疗中产生的抗体也可能会阻碍患者使用相同的基因治疗方案进行二次治疗,这将对基因治疗药物的时效性产生一定的限制。因此,临床治疗时通过AAV中和抗体(Neutralizing antibody, NAb)检测对患者进行AAV免疫的存在和程度的评估尤为重要。

图1 AAV中和抗体抑制载体转导和转基因表达的机制[1]


应用

● 临床治疗前检测,可为AAV基因治疗药物的血清型选择、给药途径、药物剂量等方案制定提供依据。

● 临床治疗中检测,通过观测NAbs变化趋势,可评价基因治疗药物是否达到药效剂量水平、药效作用及持续时间。

服务内容

1. AAV中和抗体检测服务

BrainVTA可为您的抗体或血清样品提供AAV中和抗体检测服务。利用我们生产的各AAV血清型病毒,可模拟抗体阻断病毒进入细胞的生物过程,检测血清/抗体对AAV病毒是否具有中和活性,以及计算血清/抗体中AAV抗体的中和效价。


细胞选择:HEK 293、HeLa等。

检测方案:

AAV病毒与梯度稀释的待检血清/抗体共孵育后侵染HEK293细胞;48h后,使用全波长多功能微孔板检测仪检测各血清/抗体稀释度下的荧光强度,与未加血清/抗体情况下病毒的侵染情况比较,通过IC50分析,评价待检抗体或血清的中和效果。

客户提供样品要求:

a. 样本类型:血清样本,干冰运输;

b. 样本体积:100 μL(可特殊定制);

c. 样本要求:无菌,乙肝、丙肝、HIV、梅毒、EB、CMV检测阴性。


我司优势:采用Luciferase报告基因系统,模拟抗体阻断病毒进入细胞的生物反应,更加直观地、系统地体现中和过程,具高灵敏度、 高特异性、高通量和高准确性等特点。


中和抗体检测数据展示:


图2 AAV2、AAV 5、AAV 8、AAV 9血清型病毒中和抗体检测示意图。


2.总抗体检测服务

检测疫苗免疫后血清中和抗体的表达水平。


检测方案:

通过Elisa的方法检测血清样本中的IgG和IgM表达水平,以此检测血清中抗体的表达水平。

客户提供样品要求:

a. 样本类型:血清样本,干冰运输;

b. 样本体积:100 μL(可特殊定制);

c. 样本要求:无菌,乙肝、丙肝、HIV、梅毒、EB、CMV检测阴性。


血清总抗体检测数据展示:

3. AAV9型血清样本总抗体Elisa检测数据示意。


3. AAV血清型检测

AAV血清型检测

AAV1

AAV1/2

AAV2

AAV2-7m8

AAV oligo001

AAV5

AAV6

AAV6m

AAV6.2

AAV7

AAV8

AAV9

rAAV2-retro

AAV-PHP.eB

AAV-B10

AAV-PHP.S

AAV-PAN

AAV-DJ

AAV-ShH10

AAV-ShH10(Y445F)

AAV-Rh10

AAV-Anc80L65

AAV-BR1

AAV-BI30

AAV-SCH9

AAV MaCPNS1

AAV MaCPNS2

mac

AAV DSS

更多血清型请咨询


我司优势:

高灵敏度 高特异性 高通量 高准确性


4. 各类检测用AAV生产

基因:Luciferase/EGFP/mCherry

AAV1

AAV1/2

AAV2

AAV2-7m8

AAV oligo001

AAV5

AAV6

AAV6m

AAV6.2

AAV7

AAV8

AAV9

rAAV2-retro

AAV-PHP.eB

AAV-B10

AAV-PHP.S

AAV-PAN

AAV-DJ

AAV-ShH10

AAV-ShH10(Y445F)

AAV-Rh10

AAV-Anc80L65

AAV-BR1

AAV-BI30

AAV-SCH9

AAV MaCPNS1

AAV MaCPNS2

mac

AAV DSS

更多其他血清型病毒生产请咨询


参考文献

1. Schulz M, Levy DI, Petropoulos CJ, Bashirians G, Winburn I, Mahn M, Somanathan S, Cheng SH, Byrne BJ: Binding and neutralizing anti-AAV antibodies: Detection and implications for rAAV-mediated gene therapy. Mol Ther 2023, 31(3):616-630.

2. Mendell JR, Connolly AM, Lehman KJ, Griffin DA, Khan SZ, Dharia SD, Quintana-Gallardo L, Rodino-Klapac LR: Testing preexisting antibodies prior to AAV gene transfer therapy: rationale, lessons and future considerations. Mol Ther Methods Clin Dev 2022, 25:74-83.

3. Li C, Samulski RJ: Engineering adeno-associated virus vectors for gene therapy. Nat Rev Genet 2020, 21(4):255-272.

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