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One-Bac 4.0系统作为昆虫/杆状病毒系统,其生产过程包括:杆状病毒质粒构建--种毒生产--种毒扩增--种毒感染昆虫细胞--AAV收获,几个主要部分。通过含有AAV基因组的杆状病毒感染昆虫细胞,实现生产的线性化放大,突破AAV大规模制备的壁垒。单批次产能远超其他系统,有望惠及更多病患。

One-Bac 4.0系统全新专利群

工艺开发流程


分析方法开发和质量控制

劲帆医药的⼀站式基因治疗CDMO服务平台,拥有专业且经验丰富的GMP质量控制团队,擅长方法学开发、确认/验证及合规检测,全面保障产品的质量。以下是我们可提供的质量控制的部分放行检测指标。


类别

检测项目

检测方法

鉴别和结构分析

DNA鉴别

Sanger测序、二代测序、三代测序

衣壳蛋白质鉴别

免疫印迹法、SDS-PAGE、CE、LC-MS

生物学活性

效价

基于细胞的体外生物学活性、动物实验

含量

病毒衣壳滴度

ELISA

基因组滴度

ddPCR、qPCR

感染滴度

TCID50

比滴度

基因组滴度:感染滴度比例计算

纯度

总蛋白

microBCA

衣壳蛋白纯度

SDS-PAGE、CE

病毒单体纯度

SEC-HPLC

空壳率

AUC、TEM、AEX-HPLC、SEC-MALS

粒度检测

DLS

杂质

sf9宿主细胞DNA残留

qPCR

sf9宿主细胞蛋白残留

ELISA

核酸酶残留

ELISA

感染性杆状病毒残留

嗜斑法、TCID50

杆状病毒DNA残留

qPCR

弹状病毒残留

qPCR

特定工艺相关残留(亲和配基、Triton、Tween20等)

ELISA、UV、HPLC

安全性

复制型腺相关病毒

培养+ qPCR

支原体

qPCR、培养法

螺原体

qPCR、培养法

内毒素

凝胶法、光度法

无菌

薄膜过滤法、直接接种法

异常毒性

小鼠豚鼠注射实验

其他物化性质

外观

直接观察法

pH

电位法

可见异物

灯检法



更多感兴趣的内容

高产率:

50L生产规模下,One-Bac 4.0系统生产的不同血清型AAV纯化前后均保持较高产率。



BEV传代稳定性:

One-Bac 4.0系统采用的杆状病毒表达载体(Baculovirus Expression Vector, BEV)在多代次内的传代稳定性高,确保大规模生产时,AAV批次间高产率和高病毒活性的特征不变。


高实心率:


One-Bac 4.0系统终产品AAV实心率较⾼,可达90%以上。




高感染活性:

细胞及动物实验结果表明,One-Bac 4.0系统生产的AAV感染效果较好。