2024-01-29
AAV分析表征
2023年3月8-9日,ARM(the alliance for regenerative medicine,再生医学联盟)和USP(the united states pharmacopeial convention,美国药典委员会)共同举办了为期一天半的AAV分析表征研讨会,涵盖了与AAV质量相关的各种主题。本期将分为上中下三篇,上篇和中篇为大家详细介绍了该研讨会中“空/完整衣壳表征”和“效力测试(potency assays)”主题内容,下篇将为您介绍“载体基因组滴度测定和剂量”主题内容。
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优化AAV分析方法以提高AAV基因疗法的安全性、有效性和产量(上)
优化AAV分析方法以提高AAV基因疗法的安全性、有效性和产量(中)
载体基因组滴度
载体基因组滴度(vg/mL)通常用于确定AAV基因治疗产品的临床剂量。载体基因组滴度表示每mL产品中含有目的基因组的纯化后载体颗粒的物理浓度。准确的AAV基因组滴度是临床前和临床研究剂量确定的基础。
载体基因组滴度测定方法
目前常用的基因组滴度检测方法为qPCR(quantitative polymerase chain reaction)和ddPCR(digital droplet polymerase chain reaction),这些定量技术都有其独特的工作流程和优缺点,因此需要根据具体项目(program-specific)或具体阶段(phase-specific)选择合适的测定方法。
CDMO领域的一位高管分享了一个从qPCR到ddPCR策略转变的例子,以配合客户的项目计划。在可比性研究中,qPCR和ddPCR两种方法得出的AAV2和AAV8载体基因组滴度结果相当。此外,在经多次重复分析后,发现ddPCR具有良好的中间精密度(<6% CV)。另一位演讲者也分享了一个例子,qPCR方法检测得到的的载体基因组滴度始终比ddPCR检测的结果高约2倍。
图1 不同检测方法的流程图
(图片来源:Optimizing AAV analytics to improve the safety, efficacy, and yield of AAV-based gene therapies: Takeaways from a scientific workshop,lead author:Lindsay Gasch)